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                    技術(shù)文章
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                    無(wú)血清培養(yǎng)

                    更新時(shí)間:2016-01-29 點(diǎn)擊次數(shù):1577

                    無(wú)血清培養(yǎng)基

                    (serum 

                    free 

                    medium,SFM)

                    :

                    是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞

                    在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。

                    但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白

                    組分。

                    雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)

                    的要求,

                    但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,

                    如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,

                    這時(shí)

                    需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用。

                    而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子;

                    又如需要

                    測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)

                    (抗體、

                    生長(zhǎng)因子)

                    的能力;

                    或者要大

                    規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。

                     

                     

                     

                     

                    無(wú)血清培養(yǎng)基的基本配方

                    :

                    基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。

                     

                    于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);

                    而當(dāng)其在無(wú)血清、

                    無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),

                    由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子

                    如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。

                     

                     

                     

                     

                    添加組分

                     

                     

                    1. 

                    促貼壁物質(zhì):許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng),這種情況下無(wú)血清培養(yǎng)基中一定

                    要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,

                    一般為細(xì)胞外基質(zhì),

                    如纖連蛋白、

                    層粘連蛋白等。

                    們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,

                    對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分

                    化,

                    起著重要作用。

                    纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,

                    這些細(xì)胞

                    包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、

                    CHO

                    細(xì)

                    胞、成肌細(xì)胞等。

                     

                     

                     

                    2.

                     

                    促生長(zhǎng)因子及激素:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞

                    生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞*的,如胰島素。

                     

                     

                     

                    3.

                     

                    酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在基中

                    *須含酶抑制劑,

                    以終止酶的消化作用,

                    達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。

                    zui常用的

                    是大豆胰酶;抑制劑。

                     

                     

                     

                    4.

                     

                    結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添

                    加比較大,

                    可增加培養(yǎng)基的粘度,

                    保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。

                    許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無(wú)

                    血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。

                     

                     

                     

                    5.

                     

                    微量元素:硒是zui常見的。

                    基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,這時(shí)需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子;又如需要測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)(抗體、生長(zhǎng)因子)的能力;或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。 基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);而當(dāng)其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。
                    添加組分: 1. 促貼壁物質(zhì):許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng),這種情況下基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。 2. 促生長(zhǎng)因子及激素:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞*的,如胰島素。 3. 酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。zui常用的是大豆胰酶;抑制劑。 4. 結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的基都含有牛血清白蛋白。 5. 微量元素:硒是zui常見的。

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